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耐久肠球菌坚韧链球菌-木霉CGMCC3.4004-多粘类芽孢杆菌SHMCCD73124

2025-05-02 07:20分类: 基因介绍 阅读:

 

Tris-HCl 提供稳定的缓冲环境,而 EDTA 可以螯合二价金属离子,防止核酸在电泳过程中被降解

全能核酸酶(Benzonase Nuclease)是一种来源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)的基因工程核酸内切酶,能够高效降解所有形式的DNA和RNA,包括单链、双链、线状、环状和超螺旋结构。其纯度≥99%,并带有His-tag,便于纯化和检测。 特性与优势 广谱降解能力:全能核酸酶能够将DNA和RNA降解为2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸,且不具有碱基识别特异性。 高稳定性:在广泛的条件下(如6M尿素、0.1M盐酸胍、0.4% Triton X100、0.1% SDS、1 mM EDTA、1 mM PMSF等)仍保持高效活性。 无蛋白酶活性:不具有蛋白水解活性,不会对蛋白质样品造成损伤。 His-tag:带有His-tag的全能核酸酶便于通过金属螯合层析进行纯化和检测。 应用场景 去除核酸污染:在生物制药中,全能核酸酶可用于去除疫苗、蛋白或多糖类生物制品中的核酸残留,使核酸含量符合FDA和国内的要求。 降低样品粘度:在细胞裂解后,全能核酸酶能够降解核酸,减少溶液粘度,便于后续操作。 细胞培养产物纯化:降解核酸,避免核酸对细胞产物的影响,提高纯化效率。

使用前建议在65℃水浴中加热5分钟,然后在冰浴中冷却3分钟,以避免COS位点的片段结合。

2×TBE-Urea 上样缓冲液是一种专门用于变性核酸电泳的试剂,能够有效解除核酸的二级结构,使其保持单链构型,从而实现更清晰的电泳分离效果。组成成分 该缓冲液的主要成分包括:尿素(Urea):用于解除核酸的二级结构,保持核酸的单链状态。溴酚蓝(Bromophenol Blue) 和 二甲苯青(Xylene Cyanol FF):作为示踪染料,用于观察电泳的进程。Tris、硼酸和 EDTA:维持电泳过程中的缓冲体系,确保电泳条件的稳定。聚蔗糖(Ficoll):增加样品密度,帮助样品沉入凝胶孔中。 使用方法样品处理:将 2×TBE-Urea 上样缓冲液与待测核酸样品按 1:1 比例混合,70℃加热 3-5 分钟,使核酸充分变性,之后立即置于冰上冷却。上样与电泳:将处理后的样品加入变性聚丙烯酰胺凝胶的加样孔中,进行电泳。应用场景2×TBE-Urea 上样缓冲液主要用于单链 DNA(ssDNA)和 RNA 的变性凝胶电泳,广泛应用于基因分型检测(如 SSR 标记、AFLP、RFLP 等)。它不适用于非变性凝胶电泳或蛋白电泳。

胶染法(前染):在制备琼脂糖凝胶时,按 1:10000 的比例加入 4S GelRed 染料

10 mg/ml的溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)溶液是一种常用的核酸染料,广泛应用于分子生物学实验中,尤其是在DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳检测中。 EB是一种多环芳烃荧光小分子,能够嵌入核酸的碱基对之间。当EB与双链DNA(dsDNA)结合时,荧光强度会增强约25倍,与双链RNA(dsRNA)结合时,荧光强度增强约21倍。这种特性使得EB在低浓度下(如10 µg/ml)染色后无需脱色处理,即可在紫外光下清晰观察到核酸条带。 在使用10 mg/ml EB溶液进行电泳时,通常有两种染色方法: 电泳前染色:在制胶时加入EB,使其工作浓度达到0.5 µg/ml。例如,每100 ml的琼脂糖凝胶溶液中加入5-10 µL的10 mg/ml EB溶液,混匀后倒胶。 电泳后染色:将电泳后的凝胶浸泡在含有0.5 µg/ml EB的电泳缓冲液或水中,染色15-45分钟。 需要注意的是,EB具有较强的诱变性和毒性,操作时应佩戴手套和实验服,避免直接接触皮肤。此外,EB废液应按照实验室标准进行净化处理后再丢弃,以避免环境污染。

该试剂盒还采用了dUTP替代dTTP的技术,进一步提高了反应的特异性,减少了非特异性扩增的可能性。

Tris-硼酸电泳缓冲液(10×TBE)是一种高浓度的缓冲液,广泛应用于核酸电泳实验中,特别适用于DNA和RNA的琼脂糖凝胶电泳。它由Tris、硼酸和EDTA组成,具有强大的缓冲能力,能够维持稳定的pH值,从而提高电泳的分辨率。产品特性成分:主要由900 mM Tris-硼酸和20 mM EDTA组成。工作液浓度:稀释10倍后得到的1×TBE工作液含有90 mM Tris-硼酸和2 mM EDTApH值约为8.0。缓冲能力强:适合较长时间电泳,能够维持稳定的pH值,不易出现pH波动。高分辨率:特别适用于分离小于1 kb的DNA片段,能够提供清晰的条带。保存条件:室温保存,有效期长达12个月。使用方法稀释:将10×TBE缓冲液用蒸馏水或去离子水稀释10倍,制备1×工作液。电泳操作:将稀释后的1×TBE缓冲液加入电泳槽中,确保缓冲液完全覆盖凝胶。加样后开始电泳,电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的核酸染料(如EB或Goldview)染色。在紫外灯下观察核酸条带。

如果凝胶中预先加入 EB,电泳结束后紫外灯下观察时200 bp 以下条带亮度较弱,可通过凝胶后染方法

T4 UvsX重组酶是一种来源于T4噬菌体的重组酶,属于RecA/Rad51家族的同源体。它在双链DNA断裂的修复和复制叉重新启动的过程中起重要作用。T4 UvsX重组酶能够与单链DNA结合并形成核酸蛋白复合物,该复合物通过寻找与双链DNA的互补区域进行杂交,从而完成链置换反应。功能与特性链置换能力:T4 UvsX重组酶能够与单链DNA结合,形成稳定的核酸蛋白复合物,并在双链DNA中寻找同源序列,完成链置换反应。无核酸酶活性:该酶本身不具有核酸酶活性,不会降解DNA。等温扩增:T4 UvsX重组酶是重组酶聚合酶扩增(RPA)技术的核心酶,能够在37-42℃的等温条件下高效扩增DNA。应用场景等温扩增(RPA):T4 UvsX重组酶是RPA技术的关键组分,能够在等温条件下快速、灵敏地扩增DNA。病原体检测:RPA技术可用于检测多种DNA和RNA病原体,如MERS、HIV-1、埃博拉病毒和COVID-19,检测下限通常低于100个拷贝。即时诊断(POCT):RPA技术因其快速、简便的特点,非常适合现场快速诊断试剂的开发。

高灵敏度:对核酸的迁移影响小,信噪比高,荧光信号强,背景信号低。

在生物实验中,核酸染色是检测DNA和RNA的重要步骤,但传统染料如溴化乙锭(EB)具有致癌性,对实验人员和环境存在潜在危害。4S Green Plus 无毒核酸染料作为一种新型的EB替代品,为科研人员提供了一种安全、高效且环保的选择。 4S Green Plus 是一种无毒、非致癌的核酸染料,其灵敏度与EB相当,能够检测到低浓度的核酸分子。它在295 nm和490 nm处具有荧光激发最大值,与结合DNA的EB荧光激发点相近,可在紫外灯或蓝光LED下清晰观察DNA条带。这种染料不仅安全性高,还具有高特异性和荧光稳定性,不会与其他细胞成分结合,且在实验过程中荧光信号稳定。 4S Green Plus 的使用方法灵活,既可用于凝胶前染色,也可用于凝胶后染色。在凝胶前染色时,将染料加入冷却至50-60℃的琼脂糖溶液中;在凝胶后染色时,每100 mL染色溶液中加入20-30 μL染料,染色30分钟后脱色即可。此外,4S Green Plus 适合用于琼脂糖凝胶中的双链DNA、单链DNA和RNA的检测。

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